МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ D-БИОТИНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ГОСТ EN 15607-2015

Дата введения 1 января 2017 года

Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены".

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" на основе аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 5 

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 мая 2015 г. N 77)

За принятие проголосовали:

	
		
		
		
	
	

		

			

			
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97     
			
			

			
Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97     
			
			

			
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации     
			
		
		

			

			
Армения     
			
			

			
AM     
			
			

			
Минэкономики Республики Армения     
			
		
		

			

			
Беларусь     
			
			

			
BY     
			
			

			
Госстандарт Республики Беларусь     
			
		
		

			

			
Казахстан     
			
			

			
KZ     
			
			

			
Госстандарт Республики Казахстан     
			
		
		

			

			
Киргизия     
			
			

			
KG     
			
			

			
Кыргызстандарт     
			
		
		

			

			
Молдова     
			
			

			
MD     
			
			

			
Молдова-Стандарт     
			
		
		

			

			
Россия     
			
			

			
RU     
			
			

			
Росстандарт     
			
		
		

			

			
Таджикистан     
			
			

			
TJ     
			
			

			
Таджикстандарт     
			
		
		

			

			
Украина     
			
			

			
UA     
			
			

			
Минэкономразвития Украины     
			
		
	

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 21 июля 2015 г. N 949-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15607-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 15607:2009 Foodstuffs - Determination of D-biotin by HPLC (Продукты пищевые. Определение D-биотина высокоэффективной жидкостной хроматографией).

Европейский региональный стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого является DIN (Германия).

Перевод с немецкого языка (de).

Официальные экземпляры европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и европейского регионального стандарта, на который дана ссылка, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным европейским региональным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА .

Степень соответствия - идентичная (IDT)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания D-биотина в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Метод прошел валидацию при межлабораторных сравнительных испытаниях с использованием как обогащенных проб, так и проб с естественным содержанием D-биотина, а именно концентратов типа сухого завтрака - мюсли, сухого молока для грудных детей, лиофилизированных зеленых овощей с ветчиной, лиофилизированного куриного бульона и обогащенного апельсинового сока в диапазоне значений содержания D-биотина от 16 до 200 мкг/100 г (см. приложение B ).

Примечания

1 Настоящим методом может также определяться D-биоцитин, хотя ни в одной из проб, использовавшихся при межлабораторных сравнительных испытаниях, D-биоцитин не содержался. Тем не менее открываемость как D-биотина, так и D-биоцитина превышает 90% (см. [2]  и [3] ).

2 При анализе проб, содержащих куриные яйца, метод приводит к заниженным значениям содержания D-биотина.

Приведенные ниже ссылочные нормативные документы являются обязательными для применения настоящего стандарта. Для датированных ссылок применимо только цитируемое издание. В случае недатированных ссылок используют последнее издание документа, включая все изменения.

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

Метод основан на выделении D-биотина из проб пищевых продуктов обработкой ферментами и количественном определении методом ВЭЖХ с послеколоночной дериватизацией ([2] , [3] ).

Комплексообразование D-биотина с белком авидином является весьма специфическим. Поэтому авидин, ковалентно связанный с флуоресцентной меткой - флуоресцеин-5-изотиоцианитом, используется в качестве реагента для послеколоночной дериватизации D-биотина ([4] , [5] ).

Если не указано иное, то при анализе используют только реактивы гарантированной чистоты и воды, по крайней мере, степени чистоты 1 по EN ISO 3696 или повторно перегнанную дистиллированную воду.

4.2.1 Метанол для ВЭЖХ, массовая доля основного вещества w(CH3 OH) не менее 99,8%.

4.2.2 Раствор серной кислоты молярной концентрации c(H2 SO4 ) = 1 моль/дм3 .

4.2.3 Раствор серной кислоты молярной концентрации c(H2 SO4 ) = 1,5 моль/дм3 .

4.2.4 Лимонная кислота моногидрат, массовая доля основного вещества w(C6 H8 O7 ·H2 O) не менее 99,7%.

4.2.5 Гидрофосфат натрия 2-водный, массовая доля основного вещества w(Na2 HPO4 ·2H2 O) не менее 99,8%.

4.2.6 Глутатион, массовая доля основного вещества w(C10 H17 N3 O6 S) не менее 98%.

4.2.7 Этилендиаминтетраацетат натрия (ЭДТА) 2-водный, массовая доля основного вещества w(C10 H14 N2 Na2 O8 ·2H2 O) не менее 99%.

4.2.8 Гидрофосфат калия, массовая доля основного вещества w(K2 HPO4 ) не менее 96%.

4.2.9 Дигидрофосфат калия, массовая доля основного вещества w(KH2 PO4 ) не менее 99,5%.

4.2.10 Приготовление цитратного буферного раствора

0,462 г моногидрата лимонной кислоты (4.2.4)  и 1,05 г гидрофосфата натрия 2-водного (4.2.5)  растворяют в 450 см3  дистиллированной воды. Устанавливают значение pH раствора, равное 5,7, при помощи раствора серной кислоты (4.2.3)  и затем разбавляют раствор до объема 500 см3 .

Срок хранения раствора - 1 день.

4.2.11 Приготовление раствора глутатиона массовой концентрации  

30 мг глутатиона (4.2.6)  растворяют в 3 см3  дистиллированной воды.

Срок хранения раствора - 1 день.

4.2.12 Приготовление раствора ЭДТА массовой концентрации