НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания эфиров жирных кислот хлорпропандиола (MCPD) и глицидола с применением газовой хроматографии/масс-спектометрии. Часть 1. МЕТОД С ПРИМЕНЕНИЕМ БЫСТРОЙ ЩЕЛОЧНОЙ ПЕРЕЭТЕРИФИКАЦИИ И ИЗМЕРЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ 3-MCPD И ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЕ ИЗМЕРЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ГЛИЦИДОЛА СТ РК ISO 18363-1-2016

Дата введения 2018-01-01

1 ПОДГОТОВЛЕН И ВНЕСЕН Товариществом с ограниченной ответственностью «Kazakhstan Business Solution» (Технический комитет по стандартизации ТК 91 «Химия»)

2 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Председателя Комитета технического регулирования и метрологии Министерства по инвестициям и развитию Республики Казахстан от № 296-од от 23 ноября 2016 года

Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 18363-1:2014 Animal and vegetable fats and oils - Determination of fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS - Part 1: Method using fast alkaline transesterification and measurement for 3-MCPD and differential measurement for glycidol (Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания эфиров жирных кислот хлорпропандиола (MCPD) и глицидола с применением газовой хроматографии/масс-спектометрии. Часть 1. Метод с применением быстрой щелочной переэтерификации и измерение содержания 3- mcpd и дифференциальное измерение содержания глицидола)

Международный стандарт разработан Подкомитетом БС 11 «Животные и растительные жиры и масла» Технического комитета ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Перевод с английского языка (en).

Официальный экземпляр международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий национальный стандарт и на которые даны ссылки, имеется в Едином государственном фонде нормативных технических документов

Официальной версией является текст на государственном и русском языке В разделе «Нормативные ссылки» и тексте стандарта ссылочные международные стандарты, международные документы актуализированы

Сведения о соответствии национальных (межгосударственных) стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном Приложении В. А Степень соответствия - идентичная (IDT).

3 В настоящем стандарте реализованы нормы законов Республики Казахстан «О техническом регулировании» от 9 ноября 2004 года № 603-II, «О языках в Республике Казахстан» от 11 июля 1997 года № 151-I

4 СРОК ПЕРВОЙ ПРОВЕРКИ   2023 год

 ПЕРИОДИЧНОСТЬ ПРОВЕРКИ   5 лет

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован или распространен в качестве официального издания без разрешения Комитета технического регулирования и метрологии Министерства по инвестициям и развитию Республики Казахстан

Настоящий стандарт представляет собой набор стандартов, которые могут быть использованы для определения содержания эфиров MCPD и глицидола. В настоящее время существует три предложенных международных стандарта, а настоящее введение является описанием этих методов, которые могут быть использованы аналитиком для определения того, какие методы подходят для их применения. Подробное применение каждого метода содержится в пределах области применения отдельного метода.

Данная часть настоящего стандарта представляет собой дифференциальный метод, эквивалентный стандарту DGF C-VI 18 (10) и идентичный официальному методу AOCS Cd 29с-13. Вкратце, он основан на быстром высвобождении 3-MCPD и глицидола с катализом щелочи из производных сложного эфира. Глицидол преобразовывают в индуцированный 3-MCPD. Он состоит из двух частей. Первая часть (А) позволяет определить содержание эфира 3-MCPD и эфира глицидола, тогда как вторая часть (B) определяет только эфир 3-MCPD. Обе пробы основаны на высвобождении 3-MCPD и глицидола целевых анализируемых веществ из формы сложного эфира с помощью алкоголиза с катализом щелочи при комнатной температуре. В части А подкисленный раствор хлорида натрия используется для остановки реакции и преобразовывает глицидол в индуцированный 3-MCPD. 3-MCPD и глицидол становятся неразличимыми в части А. В части B, остановка реакции достигается путем добавления подкисленного безхлоридного солевого раствора, который предотвращает преобразование глицидола в индуцированный MCPD. Часть B позволяет определить подлинное содержание 3-MCPD. И, наконец, содержание глицидола в образце является пропорциональным разности обеих проб (А - B), и может быть рассчитано после определения коэффициент преобразования из глицидола в 3-MCPD. Данная часть настоящего стандарта применима для быстрого определения эфира 3- MCPD и глицидола в рафинированных и не рафинированных растительных маслах и жирах. Данная часть настоящего стандарта может применяться к животным жирам и к маслам и жирам, используемым для жарки, но анализ беспристрастности проводится до анализа этих матриц. Любое свободное анализируемое вещество в образце будет включен в результаты, но стандарт не допускает различия между свободными и связанными анализируемыми веществами. На момент опубликования, исследования не показали никаких признаков содержания свободного анализируемого вещества столь же высоко как этерифицированное содержание анализируемого вещества в рафинированных растительных маслах и жирах. Данная часть настоящего стандарта может быть переработана таким образом, чтобы было осуществимо определение 2-MCPD, но опять же, анализ беспристрастности проводится до анализа этого анализируемого вещества.

Вторая часть предлагаемых стандартов для определения эфира MCPD и глицидола представляет официальный метод АОС Cd 29b-13. Вкратце, он основан на медленном щелочном высвобождении MCPD и глицидола из производных сложного эфира. Глицидол последовательно преобразовывается в 3-MBPD. Вторая часть предлагаемых стандартов состоит из двух процедур подготовки образца, отличающихся по использованию внутренних стандартов. Обе части могут быть использованы для определения эфира

2- MCPD и 3-MCPD. В части А определяется предварительный результат для эфира глицидола. Поскольку 3-MCPD, присутствующий в образце, будет преобразован в несколько меньшей степени в индуцированный глицидол путем подготовки образца, часть B служит для количественной оценки этого объема введенного глицидола, который впоследствии вычитается из предварительного результата глицидола в части А. Эффективность расщепления эфира может контролироваться посредством использования изомеров MCPD без изотопных меток в пробе А и изотопно-меченых эфиров 2-MCPD и 

3-MCPD в части B. Обе пробы А и B основаны на высвобождении 2-MCPD, 3-MCPD и глицидола целевых анализируемых веществ из сложного эфира путем медленного алкоголиза с катализом щелочи в холодном состоянии. В обеих процедурах подготовки образца реакция останавливается добавлением подкисленного концентрированного раствора бромида натрия таким образом, чтобы преобразовать нестабильный и летучий глицидол в 3-MBPD, который показывает сопоставимые свойства 3-MCPD в отношении его стабильности и хроматографической производительности. Основной избыток ионов бромида предотвращает нежелательное образование 3-MCPD от глицидола в случае с образцами, которые содержат природные количества хлорида. Вторая часть предлагаемых стандартов применима для определения эфира 3-MCPD, 2-MCPD и глицидола в рафинированных и нерафинированных растительных маслах и жирах. Вторая часть предлагаемых международных стандартов может применяться к животным жирам, маслам и жирам, используемым для жарки, но анализ беспристрастности проводится перед анализом этих матриц. Любое свободное анализируемое вещество в образце будет включено в результаты, но стандарт не допускает различий между свободными и связанными анализируемыми веществами. На момент опубликования, исследования не показали каких-либо признаков содержания свободного анализируемого вещества настолько высоко, что и содержание этерифицированного анализируемого вещества в рафинированных растительных маслах и жирах.

Третья часть предлагаемых стандартов для определения эфира MCPD и глицидола представляет официальный метод АОС Cd 29а-13. Вкратце, он основан на преобразовании глицидиловых эфиров в 3-MBPD эфиры, и на медленном высвобождении MCPD и MCPD с кислотным катализом из производных сложных эфиров. Третья часть предлагаемых стандартов основывается на разовой подготовке образца, в котором глицидиловые эфиры преобразовываются в моноэфиры MBPD; 2-MCPD, 3-MCPD и 3-MBPD свободных анализируемых веществ высвобождаются путем медленного кислотно-катализируемого алкоголиза. 3-MBPD представляет подлинное содержание связанного глицидола. Третья часть предлагаемых стандартов может быть применена для определения эфира 2-MCPD,

3- MCPD и глицидола в рафинированных и не рафинированных растительных маслах и жирах. Третья часть предлагаемых стандартов применяется к животным жирам и маслам и жирам, используемым для жарки, но анализ беспристрастности проводится перед анализом этих матриц. Метод подходит для анализа связанных (этерифицированных) анализируемых веществ, но при необходимости, третья часть предлагаемых стандартов выполняется выполнена без первоначального преобразования глицидиловых эфиров. При такой установке, свободные и связанные формы 2-MCPD и 3-MCPD будут включены в результаты, и количество свободных анализируемых веществ может быть рассчитано как разность между двумя определениями, выполненными в обеих установках. На момент опубликования, исследование не показало каких-либо признаков свободного анализируемого вещества настолько высоко, что и в содержании этерифицированного анализируемого вещества в рафинированных растительных маслах и жирах.

Настоящая часть стандарта устанавливает порядок косвенного определения эфиров 3-MCPD (связанный 3-MCPD) и возможного свободного 3-MCPD после расщепления эфира с катализом щелочи и дериватизации с фенилборной кислотой (РВА). Настоящая часть стандарта позволяет выполнить косвенное определение глицидиловых эфиров (связанный глицидол) с предположением, что отсутствуют другие вещества, которые вступают в реакцию при комнатной температуре с неорганическим хлоридом для образования 3-MCPD.

Настоящая часть стандарта применима к твердым и жидким жирам и маслам. Молоко и молочные продукты (или жир, получаемый из молока и молочных продуктов) исключаются из области применения настоящей части стандарта.

Примечание - Настоящий стандарт можно применять как руководство для создания рабочих процедур в соответствии с [8] для конкретных задач с учетом установленных норм точности.

Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные документы. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения):

ISO 3696:1987 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний).

В настоящем стандарте применяются следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 Связанный 3-MCPD (bound 3-MCPD): Содержание всех производных 3-MCPD, расщепленных путем алкоголиза с катализом щелочи (особенно эфиры жирных кислот) в соответствии с аттестованным методом.

Примечания

1 Содержание 3-MCPD рассчитывается и определяется как массовая доля, в миллиграммах на килограмм (мг / кг).

2 В жирах и маслах количество свободного 3-MCPD, которое может возникнуть, является довольно низким, но все же имеет влияние на результат.

3.2 Связанный глицидол (bound glycidol): Содержание всех производных глицидола, расщепленных путем алкоголиза с катализом щелочи (особенно эфиры жирных кислот) в соответствии с указанным стандартом.

Примечания

1 Содержание глицидола рассчитывается и определяется как массовая доля, в миллиграммах на килограмм (мг/кг).

2 Присутствие свободного глицидола в жирах и маслах маловероятно из-за нестабильности этого соединения.

Для определения содержания связанного 3-MCPD и связанного глицидола как свободного 3-MCPD (проба А), в аликвоту образца вводится суррогатный стандартный d5-3-MCPD-1,2-бис-пальмитоил эфир и растворяется в третично-бутиловом метиловом эфира (tBME). Добавление разбавленного раствора гидроксида натрия или метоксида натрия в метанол приведет к высвобождению 3-MCPD и глицидола. Эта реакция останавливается путем добавления избыточного количества хлорида натрия в кислотный раствор. В кислой среде свободный глицидол реагирует с неорганическим хлоридом к дополнительному 3-MCPD и небольшому количеству 2-MCPD. Нежелательные неполярные соединения в образце удаляются путем двойной экстракции водной фазы с изогексаном. Анализируемое вещество вместе с суррогатным стандартом переносятся в органическую фазу путем многократной экстракции водной фазы с диэтиловым эфиром, этилацетатом или смесью обоих растворителей. Дериватизация происходит в органической фазе в результате реакции с РВА. Для того чтобы удалить избыточное количество РВА, сконцентрируйте анализируемые вещества и перенесите их в инертный органический растворитель, экстракт образца помещается над небольшим количеством безводного сульфата натрия и выпаривается до сухого состояния под потоком азота перед окончательным повторным растворением в изооктане для измерения путем GC-MS.

Для определения связанного 3-MCPD, вторая аликвота образца (проба B) вводится в суррогатный стандарт рабочего раствора d5-3-MCPD-1,2-бис-пальмитоил эфир и растворяется в tBME. Добавление разбавленного раствора гидроксида натрия или метоксида натрия в метанол приведет к высвобождению свободного 3-MCPD и свободного глицидола. Эта реакция останавливается добавлением избыточного количества кислого безхлоридного солевого раствора (например, сульфат натрия, сульфат аммония, бромид натрия). В безхлоридной кислой среде, свободный глицидол реагирует с различными продуктами в зависимости от используемой соли, но не создает дополнительный 3-MCPD. Дополнительную подготовку образцов и измерения проводятся в соответствии с описанием для пробы А.

Для расчета связанного глицидола, разность обоих определений (проба А и B) умножается на нестехиометрический коэффициент, отражающий преобразование глицидола в 3-MCPD. Эта процедура основана на предположении, что разность между определениями обусловлена исключительной встречаемостью глицидиловых эфиров. К

Количественное определение анализируемых веществ осуществляется с использованием d5-3-MCPD-1,2-бис-пальмитоил эфира в качестве суррогатного стандарта. Поэтому никакого контроля полноты расщепления эфира не требуется. 

Градуировка за весь метод делается периодически и служит для определения линейности метода, относительного восстановления и в случае связанного глицидола для определения коэффициента преобразования. До тех пор пока метод остается неизмененным, ежедневную калибровку выполнять необязательно.

Образцы, которые содержат 3-MCPD и не содержат глицидол, приводят к снижению значений (приблизительно от 2 % до 10 %) при использовании процедуры B вместо процедуры А. Разность обусловлена изотопным эффектом при процедуре B. Этот эффект может быть определен дозированием незагрязненного образца масла с равным количеством 3-MCPD-1,2-бис-дипальмитоил эфира и d5-3-MCPD-1,2-бис-дипальмитоил эфира перед разделением на две аликвоты. Аликвоты анализируются трижды согласно процедуре А и B. Из определений может быть определен коэффициент коррекции, который представляет собой отношение результатов процедур A и B. Изотопный эффект проявляется при наличии связанного глицидола.

Поскольку 3-MCPD может возникнуть в некоторых полимерах, используемых для смол влажного усиления и для других целей, рекомендуется, чтобы холостой образец анализировался каждый день для контроля нежелательных загрязнений. Пустая проба представляет собой масло, которое не содержит 3-MCPD или глицидол, например, растительное оливковое масло. Загрязнение может произойти из-за расходных материалов, например, флаконов с навинчивающейся крышкой или фильтров. Запекание стекла при температуре от 400 °С до 500 °С может частично решить эту проблему. Наилучшим решением является использование незагрязненных материалов.