МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ МОЛОКО. ПОДСЧЕТ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК. ЧАСТЬ 2. РУКОВОДСТВО ПО РАБОТЕ ФЛУОРООПТО-ЭЛЕКТРОННЫХ СЧЕТЧИКОВ ГОСТ ISO 13366-2-2014

Дата введения 1 июля 2017 года

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5 

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. N 45)

За принятие стандарта проголосовали:

	
		
		
		
	
	

		

			

			
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97     
			
			

			
Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97     
			
			

			
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации     
			
		
	
	

		

			

			
Беларусь     
			
			

			
BY     
			
			

			
Госстандарт Республики Беларусь     
			
		
		

			

			
Киргизия     
			
			

			
KG     
			
			

			
Кыргызстандарт     
			
		
		

			

			
Молдова     
			
			

			
MD     
			
			

			
Молдова-Стандарт     
			
		
		

			

			
Россия     
			
			

			
RU     
			
			

			
Росстандарт     
			
		
		

			

			
Таджикистан     
			
			

			
TJ     
			
			

			
Таджикстандарт     
			
		
		

			

			
Узбекистан     
			
			

			
UZ     
			
			

			
Узстандарт     
			
		
	

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 сентября 2016 г. N 1196-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 13366-2-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 13366-2:2006/IDF 148-2:2006 "Молоко. Подсчет соматических клеток. Часть 2. Руководство по работе флуороопто-электронных счетчиков" ("Milk - Enumeration of somatic cells - Part 2: Guidance of the operation of fluoro-opto-electronic counters", IDT).

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 5 "Молоко и молочные продукты" Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO) и Международной молочной федерацией (IDF).

Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения  о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт устанавливает руководство по эксплуатации флуороопто-электронных счетчиков соматических клеток с использованием в секции подсчета метода вращающегося диска или проточной цитометрии, используемых при подсчете соматических клеток как в сыром, так и в химически консервированном молоке.

Настоящий стандарт применяют для подсчета соматических клеток как в сыром коровьем молоке, так и в сыром козьем, овечьем и буйволином молоке при соблюдении необходимых условий.

Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные документы. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).

ISO 8196-1:2009 Milk - Definition and evaluation of the overall accuracy of alternative methods of milk analysis - Part 1: Analytical attributes of alternative methods (Молоко. Определение и оценка общей точности альтернативных методов анализа молока. Часть 1. Аналитические признаки альтернативных методов)

ISO 8196-2:2009 Milk - Definition and evaluation of the overall accuracy of alternative methods of milk analysis - Part 2: Calibration and quality control in the dairy laboratory (Молоко. Определение и оценка общей точности альтернативных методов анализа молока. Часть 2. Калибровка и контроль качества в лаборатории по анализу молочной продукции)

ISO 13366-1:2008 Milk - Enumeration of somatic cells - Part 1: Microscopic method (Reference method) (Молоко. Подсчет соматических клеток. Часть 1. Метод с применением микроскопа)

ISO Guide 34:2009 General requirements for the competence of reference material producers (Общие требования к компетентности производителей стандартных образцов)

ISO/IEC 17043:2010 <1> Conformity assessment - General requirements for proficiency testing (Оценка соответствия. Общие требования к проверке квалификации)

<1> Действует взамен ISO/IEC Guide 43-1:1997.

В настоящем стандарте применяют термины и определения, установленные в ISO 8196-1 и ISO 8196-2, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 контрольный метод (reference method): Метод подсчета соматических клеток, установленный в настоящем стандарте.

3.2 соматические клетки (somatic cells): Клетки, интенсивность флуоресценции которых при окрашивании ДНК в ядрах превышает пороговую.

Примечание - Выражается количеством соматических клеток в см3 .

Флуороопто-электронные счетчики имеют системы ввода реагентов и пробы для анализа, секцию смешивания и секцию подсчета. В секции смешивания анализируемую пробу смешивают с буферной смесью и окрашивающим раствором. Часть полученной смеси перемещают в секцию подсчета и наносят на предметную плоскость. Каждая окрашенная частица, обнаруживаемая в флуоресцентном микроскопе, испускает электрический импульс, который фильтруется, усиливается и регистрируется. Распределение по высоте результирующего импульса обрабатывается электронным способом, посредством чего происходит разграничение между шумовыми сигналами и импульсами, которые испускаются окрашенными соматическими клетками. Уровень амплитудного селектора импульсов может быть фиксированным или динамичным.

В секции смешивания дозируют и смешивают строго контролируемые объемы пробы для анализа и буферного/окрашивающих растворов. Смешивание можно осуществлять в чашке, в смесительной камере, в центрифуге, в петле для образцов или в трубке, ведущей к проточной кювете.

В секции подсчета можно использовать дисковую или проточную цитометрию. В случае применения дисковой цитометрии тонкую пленку смеси наносят через насадку на верхнюю часть вертикально вращающегося диска. Эта вращающаяся поверхность служит подвижной предметной плоскостью флуоресцентного микроскопа. При использовании проточной цитометрии часть смеси помещают в высокоскоростной поток окружающей корпус жидкости в капиллярной проточной кювете. В результате ускорения смесь образует тонкую струю, в которой динамически фокусируются и выравниваются в линию соматические клетки. Эта струя проходит перед объективом флуоресцентного микроскопа.

В некоторых приборах в секции подсчета содержится два канала. Исходя из обеспечения аналитического качества, такая ситуация считается эквивалентной работе с двумя отдельными модулями, таким образом, что рабочие характеристики оцениваются отдельно для каждого канала.

5.1 Сосуды для отбора проб

Сосуды для отбора проб должны быть пригодны для переноса проб с места отбора проб в лабораторию без загрязнения или изменения состава.

Сосуды для отбора проб должны быть герметичными и после заполнения иметь достаточно свободного объема. Слишком большой свободный объем может стать причиной вспенивания, слишком малый свободный объем затруднит смешивание.

5.2 Отбор проб

5.2.1 Общие положения

Оборудование для отбора проб (т.е. колбы для проб, лабораторные стаканы и пробоотборники) должно быть чистым и сухим. Автоматические пробоотборники при использовании должны соответствовать установленным требованиям.

Рекомендуется немедленно охладить образцы для анализа после отбора до температуры 0 °C - 6 °C и хранить при этой температуре до подсчета (см. 5.4 ) во избежание необходимости консервирования. Следует избегать замораживания. При необходимости консервирования соответствующие способы химического консервирования образцов для анализа установлены в 5.3 .

5.2.2 Пробы сборного молока

Перед отбором проб необходимо тщательно перемешать сырое сборное молоко. При недостаточном перемешивании соматические клетки будут концентрироваться в верхних и нижних слоях.

5.2.3 Пробы молока от конкретных животных

Выделение соматических клеток в молоко во время доения происходит неравномерно. Для получения репрезентативного результата подсчета для всего процесса доения необходимо получить репрезентативные пробы для всего процесса доения. Для диагностических целей достаточна выборка части надоенного молока.