Документ на русском языке

ГОСТ Р 51197-98 (ИСО 4133-79) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ Метод определения глюконо- -лактона Meat and meat products. Method for determination of glucono- -lactone content

Дата введения 2000-01-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 28 августа 1998 г. N 335

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 4133-79 "Мясо и мясные продукты. Определение содержания глюконо- -лактона" с дополнительными требованиями, отражающими потребности экономики страны (6.6, 6.8, 6.12, 7.1 и 9.1)

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения глюконо- -лактона.

2 Нормативные ссылки

ГОСТ 9793-74 Продукты мясные. Методы определения влаги

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1-91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

3 Определение

Массовая доля глюконо- -лактона - массовая доля глюконо- -лактона, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в процентах.

4 Сущность метода

Глюконо- -лактон экстрагируют из пробы продукта, взятой на испытание, ледяным раствором хлорной кислоты. Смесь центрифугируют, фильтруют, затем проводят гидролиз глюконо- -лактона, содержащегося в фильтрате, гидроксида калия с образованием глюконата.

Преобразуют глюконат в 6-фосфоглюконат в ходе реакции с аденозин-5-трифосфатом (АТФ) в присутствии глюконаткиназы (ГК):

глюконат + АТФ 6-фосфоглюконат + АДФ.

Восстанавливают 6-фосфоглюконатом эквивалентное количество никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ) в присутствии 6-фосфоглюконатдегидрогеназы (6-ФГДГ):

6-фосфоглюконат + НАДФ НАДФН + СО + Н + рибулозо-5-фосфат.

Измеряют массовую долю образовавшейся восстановленной формы никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФН) на спектрофотометре при длине волны 365 нм.

5 Реактивы

Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х.ч.). Все растворы, кроме растворов неорганических соединений (5.1 и 5.2), должны храниться в закрытой посуде из темного стекла, тщательно вымытой и пропаренной или стерилизованной.

Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть деминерализованной или бидистиллированной, полученной в стеклянном дистилляторе.

Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной или деминерализованной.

Примечание - Однократно дистиллированная вода может содержать ионы металлов, которые снижают активность ферментов, а деминерализованная вода может содержать микроорганизмы, увеличивающие неспецифическую фоновую ферментативную активность и искажающие результаты анализа.

Препарат НАДФ должен содержать не менее 90% основного вещества.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.

5.1 Раствор хлорной кислоты (HClO )=0,4 моль/дм

17,3 см раствора хлорной кислоты массовой доли 70% и плотности 1,67 г/см помещают в мерную колбу вместимостью 500 см и доводят объем раствора до метки водой.

Примечание - При использовании хлорной кислоты меньшей массовой доли проводят перерасчет объема кислоты, используемого для осаждения белков.

5.2 Раствор гидроксида калия (KOH)=2 моль/дм

Растворяют 56,1 г гидроксида калия в воде, доводят объем раствора до 500 см .

5.3 Буферный раствор активной кислотности 8,0 рН

Растворяют 2,64 г глицилглицина (С Н N O ) и 0,284 г хлорида магния гексагидрата (MgCl ·6Н О) в 150 см воды. Устанавливают активную кислотность раствора 8,0 рН при 20 °С раствором гидроксида калия (5.2), используя для измерений рН-метр. Доводят объем раствора до 200 см .

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °С.

5.4 Раствор НАДФ

Растворяют 50 мг динатриевой соли никотинамидадениндинуклеотидфосфорной кислоты (НАДФ-Na ) в 5,0 см воды.

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °С.

5.5 Раствор аденозин-5-трифосфата (АТФ)

Растворяют 250 мг динатриевой соли аденозин-5-трифосфорной кислоты (АТФ-Na ) и 250 мг гидрокарбоната натрия (NaHCO ) в 5,0 см воды.

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °С.

5.6 Суспензия 6-ФГДГ

Используют поставляемую в готовом виде суспензию 6-фосфоглюконатдегидрогеназы из дрожжей, содержащую 6-ФГДГ концентрации 2,0 мг/см и удельной активности не менее 220 Е/см , а также глюконаткиназу и НАДФН-оксидазу массовых долей не более 0,05% каждого.

Суспензия устойчива не менее 6 мес при температуре 4 °С.

5.7 Суспензия ГК

Используют поставляемую в готовом виде суспензию глюконаткиназы из E.coli, содержащую ГК концентрации 1,0 мг/см и удельной активности не менее 26 Е/см и НАДФН массовой доли не более 0,05%.

Суспензия устойчива не менее 6 мес при температуре 4 °С.