ГОСТ Р 51197-98 (ИСО 4133-79) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ Метод определения глюконо- -лактона Meat and meat products. Method for determination of glucono- -lactone content

1 РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 28 августа 1998 г. N 335

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 4133-79 "Мясо и мясные продукты. Определение содержания глюконо- -лактона" с дополнительными требованиями, отражающими потребности экономики страны (6.6, 6.8, 6.12, 7.1 и 9.1)

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения глюконо- -лактона.

ГОСТ 9793-74 Продукты мясные. Методы определения влаги

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1-91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

Массовая доля глюконо- -лактона  - массовая доля глюконо- -лактона, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в процентах.

Глюконо- -лактон экстрагируют из пробы продукта, взятой на испытание, ледяным раствором хлорной кислоты. Смесь центрифугируют, фильтруют, затем проводят гидролиз глюконо- -лактона, содержащегося в фильтрате, гидроксида калия с образованием глюконата.

Преобразуют глюконат в 6-фосфоглюконат в ходе реакции с аденозин-5-трифосфатом (АТФ) в присутствии глюконаткиназы (ГК):

глюконат + АТФ    6-фосфоглюконат + АДФ.

Восстанавливают 6-фосфоглюконатом эквивалентное количество никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ) в присутствии 6-фосфоглюконатдегидрогеназы (6-ФГДГ):

6-фосфоглюконат + НАДФ    НАДФН + СО  + Н  + рибулозо-5-фосфат.

Измеряют массовую долю образовавшейся восстановленной формы никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФН) на спектрофотометре при длине волны 365 нм.

Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х.ч.). Все растворы, кроме растворов неорганических соединений (5.1 и 5.2), должны храниться в закрытой посуде из темного стекла, тщательно вымытой и пропаренной или стерилизованной.

Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть деминерализованной или бидистиллированной, полученной в стеклянном дистилляторе.

Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной или деминерализованной.

Примечание - Однократно дистиллированная вода может содержать ионы металлов, которые снижают активность ферментов, а деминерализованная вода может содержать микроорганизмы, увеличивающие неспецифическую фоновую ферментативную активность и искажающие результаты анализа.

Препарат НАДФ должен содержать не менее 90% основного вещества.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.

17,3 см  раствора хлорной кислоты массовой доли 70% и плотности 1,67 г/см  помещают в мерную колбу вместимостью 500 см  и доводят объем раствора до метки водой.

Примечание - При использовании хлорной кислоты меньшей массовой доли проводят перерасчет объема кислоты, используемого для осаждения белков.

Растворяют 56,1 г гидроксида калия в воде, доводят объем раствора до 500 см .

Растворяют 2,64 г глицилглицина (С Н N O ) и 0,284 г хлорида магния гексагидрата (MgCl ·6Н О) в 150 см  воды. Устанавливают активную кислотность раствора 8,0 рН при 20 °С раствором гидроксида калия (5.2), используя для измерений рН-метр. Доводят объем раствора до 200 см .

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °С.

Растворяют 50 мг динатриевой соли никотинамидадениндинуклеотидфосфорной кислоты (НАДФ-Na ) в 5,0 см  воды.

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °С.

Растворяют 250 мг динатриевой соли аденозин-5-трифосфорной кислоты (АТФ-Na ) и 250 мг гидрокарбоната натрия (NaHCO ) в 5,0 см  воды.

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °С.

Используют поставляемую в готовом виде суспензию 6-фосфоглюконатдегидрогеназы из дрожжей, содержащую 6-ФГДГ концентрации 2,0 мг/см  и удельной активности не менее 220 Е/см , а также глюконаткиназу и НАДФН-оксидазу массовых долей не более 0,05% каждого.

Суспензия устойчива не менее 6 мес при температуре 4 °С.

Используют поставляемую в готовом виде суспензию глюконаткиназы из E.coli, содержащую ГК концентрации 1,0 мг/см  и удельной активности не менее 26 Е/см  и НАДФН массовой доли не более 0,05%.

Суспензия устойчива не менее 6 мес при температуре 4 °С.