ОКС 67.120.10
Отправить по почте
ГОСТ Р 51198-98 (ИСО 4134-78) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ Метод определения -(+)-глутаминовой кислоты Meat and meat products. Method for determination of -(+)-glytamic acid content
Данный документ может применяться на территории Республики Казахстан в соответствии с приказом Председателя Комитета технического регулирования и метрологии Министерства индустрии и новых технологий Республики Казахстан от 23.01.2012 г. № 44-од
ОКС 67.120.10
ОКСТУ 9209
Дата введения 2000-01-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 28 августа 1998 г. N 336
3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 4134-78 "Мясо и мясные продукты. Определение содержания -(+)-глутаминовой кислоты" с дополнительными требованиями, отражающими потребности экономики страны (2, 4, 6.6, 6.8, 6.12, 6.13, 7.1 и 9.1)
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения -(+)-глутаминовой кислоты.
2 Нормативные ссылки
ГОСТ 9793-74 Продукты мясные. Методы определения влаги
ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1-91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб
3 Определение
Массовая доля -(+)-глутаминовой кислоты - массовая доля -(+)-глутаминовой кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в процентах.
4 Сущность метода
-(+)-глутаминовую кислоту экстрагируют из пробы продукта, взятой на испытание, ледяным раствором хлорной кислоты. Смесь центрифугируют, фильтруют и доводят активную кислотность фильтрата до требуемого значения. Проводят ферментативное преобразование -(+)-глутамата в -кетоглутарат в ходе реакции с никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) в присутствии глутаматдегидрогеназы (ГДГ):
-(+)-глутамат + НАД + Н О -кетоглутарат + НАДН + NН + Н .
Затем окисляют эквивалентное количество восстановленной формы НАДН хлоридом йодонитротетразолия (ИНТ) в присутствии липоаминдегидрогеназы (ЛАДГ):
НАДН + ИНТ-хлорид + Н HAД + формазан.
Измеряют массовую долю образовавшегося формазана на спектрофотометре при длине волны 492 нм.
5 Реактивы
Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х.ч.). Все растворы, кроме растворов неорганических соединений (5.1 и 5.2), должны храниться в закрытой посуде из темного стекла, тщательно вымытой и пропаренной или стерилизованной.
Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть деминерализованной или бидистиллированной, полученной в стеклянном дистилляторе.
Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной или деминерализованной.
Примечание - Однократно дистиллированная вода может содержать ионы металлов, которые снижают активность ферментов, а деминерализованная вода может содержать микроорганизмы, увеличивающие неспецифическую фоновую ферментативную активность и искажающие результаты анализа.
Препарат НАД должен содержать не менее 90% основного вещества.
-(+)-глутаминовая кислота должна содержать не менее 98% основного вещества.
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов при условии соответствия качества реактивов требованиям настоящего стандарта.
5.1 Раствор хлорной кислоты (HClO )=1,0 моль/дм
8,6 см раствора хлорной кислоты массовой доли 70% и плотности 1,67 г/см помещают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят объем раствора до метки водой.
Примечание - При использовании хлорной кислоты меньшей массовой доли проводят перерасчет объема кислоты, используемой для осаждения белков.
5.2 Раствор гидроксида калия (KOH)=2 моль/дм
Растворяют 56,1 г гидроксида калия (KOH) в воде, доводят объем раствора до 500 см .
5.3 Буферный раствор активной кислотности 8,6 рН
5.3.1 Растворяют 1,86 г гидрохлорида триэтаноламина в воде, доводят активную кислотность раствора до 8,6 рН раствором гидроксида калия (5.2), используя для измерений рН-метр. Затем добавляют 0,68 г октилфенолдекаэтиленгликолевого эфира (например, Тритон =100) и доводят объем раствора до 100 см водой.
5.3.2 Растворяют 0,86 г двузамещенного фосфорнокислого калия (K НРO ) и 0,007 г однозамещенного фосфорнокислого калия (KН РO ) в воде и доводят объем раствора до 100 см .
5.3.3 Смешивают 20 см раствора по 5.3.1 и 5 см раствора по 5.3.2.
Раствор хранят при температуре 4 °С.
5.4 Раствор НАД
Навеску НАД массой 0,025 г растворяют в 5,0 см воды в небольшой колбе со шлифом, колбу закрывают пробкой.
Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °С.
5.5 Раствор йодонитротетразолия [2-(р-йодофенил)-3-(р-нитрофенил)-5-фенилтетразолия] хлорида (ИНТ-хлорида)
Растворяют 0,030 г ИНТ-хлорида в 50 см воды, колбу закрывают пробкой.
Раствор устойчив не менее 2 мес при температуре 4 °С в темноте.
5.6 Раствор ЛАДГ
Растворяют 0,003 г лиофильно высушенной липоаминдегидрогеназы в 1 см воды.