ГОСТ Р 51239-98 (ДИН 1138-94) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ Метод определения L-яблочной кислоты Fruit and vegetable juices. Determination of L-malic acid content

ОКС 67.080*

ОКСТУ 9109

 _______________

* В указателе "Национальные стандарты" 2005 г. ОКС 67.160.20. - Примечание "КОДЕКС".       

1 РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25 декабря 1998 г. N 462

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН 1138-94 "Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение L-яблочной кислоты. Спектрофотометрическое определение НАДФ (никотинамидадениндинуклеотида)" с дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 5, 7, 8 и 9 и пункты 6.1 и 6.5)

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовой концентрации L-яблочной кислоты в виде свободной кислоты или соли.

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:  

ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия  

ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия  

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

3.1 В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:  

массовая концентрация L-яблочной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках:  Массовая концентрация L-яблочной кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в г/дм .

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:  

НАД -   -никотинамидадениндинуклеотид;

НАДН -   -никотинамидадениндинуклеотид (восстановленная форма);  

ГОТ - глутаматоксалоацетаттрансаминаза;  

L-МДГ - L-малатдегидрогеназа;

Е - международная единица, определяющая количество (активность) фермента, которое служит катализатором для превращения при 25 °С 1 мкмоля вещества в минуту.

Метод [1, 2] основан на ферментативном преобразовании L-яблочной кислоты в оксалоацетат под действием НАД в присутствии L-МДГ, смещении равновесия реакции путем связывания образовавшегося оксалоацетата L-глутаматом в присутствии ГОТ и спектрофотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НАДН, эквивалентной массовой концентрации L-яблочной кислоты в пробе [1, 2].

5.1 Общие требования

При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения L-яблочной кислоты при условии, что качество реагентов не ниже указанного в настоящем стандарте.

Препараты глицилглицина, L-глутаминовой кислоты и НАД должны содержать не менее 90% основного вещества.

5.2 Глицилглициновый буферный раствор активной кислотности 10,0 pH

4,75 г глицилглицина и 0,88 г L-глутаминовой кислоты растворяют в 50 см  дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Устанавливают активную кислотность раствора равной 10,0 pH приблизительно 4,6 см  раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации   (NaOH)=10 моль/дм . Объем раствора доводят дистиллированной водой до 60 см . Буферный раствор устойчив при температуре 4 °С 3 мес.

5.3 Раствор НАД

0,420 г НАД растворяют в 12 см  дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4 °С 1 мес.

5.4 Суспензия фермента ГОТ

Раствор глутаматоксалоацетаттрансаминазы массовой концентрации 0,002 г/см , содержащий L-аспартат и   -кетоглутарат в качестве субстрата, смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации   ((NH ) SO )=3,2 моль/дм . Удельная активность суспензии ГОТ составляет не менее 400 Е/см . Суспензия устойчива при температуре 4 °С 12 мес.

5.5 Суспензия фермента L-МДГ

Раствор L-малатдегидрогеназы массовой концентрации 0,005 г/см  смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации  ((NH ) SO )=3,2 моль/дм . Удельная активность суспензии L-МДГ составляет не менее 6000 Е/см . Суспензия устойчива при температуре 4 °С 12 мес.

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1-6.4.

6.1 Дозаторы пипеточные объемами доз 100, 50 и 25 см  и относительной погрешностью дозирования ±1% [3] или пипетки градуированные номинальной вместимостью 2,0; 1,0; 0,5; 0,2; 0,1 и 0,02 см  и допускаемой относительной погрешностью ±1%.

6.2 Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя 1 см для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм.