ГОСТ Р 51257-99 (ДИН 10325-86) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ СЫРЫ ПЛАВЛЕНЫЕ Метод определения лимонной кислоты Processed cheeses. Method for determination of citric acid content

ОКС 67.100.20*

ОКСТУ 9109  

 _____________________

* В указателе "Национальные стандарты" 2005 г.  

ОКС 67.100.30. - Примечание "КОДЕКС".

1 РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 12 апреля 1999 года N 119

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН 10325-86 "Ферментативное определение лимонной кислоты в плавленом сыре" с дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 3, 4, 5, 6 и 7)

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт распространяется на сыры плавленые и продукты на основе плавленого сыра и устанавливает метод определения массовой доли лимонной кислоты в виде свободной кислоты или ее соли.

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4201-79 Натрий углекислый кислый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4529-78 Цинк хлористый. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

3.1 В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:

массовая доля лимонной кислоты:  Массовая доля лимонной кислоты и ее соли (цитрата) в пересчете на безводную лимонную кислоту, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в г/100 г.

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:

НАДН -   -никотинамидадениндинуклеотид (восстановленная форма);

L-МДГ - L-малатдегидрогеназа;

L-ЛДГ - L-лактатдегидрогеназа;

ЦЛ - цитратлиаза;

Е - международная единица, определяющая количество (активность) фермента, которое служит катализатором для превращения при 25 °С 1 мкмоля вещества в минуту.

Метод основан на экстрагировании лимонной кислоты и ее солей из пробы водой, освобождении экстракта от жира и белка, ферментативном гидролизе лимонной кислоты в присутствии ЦЛ до щавелевоуксусной кислоты с последующим декарбоксилированием ее до пировиноградной кислоты и восстановлении образовавшихся кислот под действием НАДН в присутствии ферментов L-МДГ и L-ЛДГ до L-яблочной и L-молочной кислот, фотометрическом измерении массовой доли израсходованного НАДН, эквивалентного массовой доле лимонной кислоты или ее соли.

В ходе анализа протекают следующие ферментативные реакции:

При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.

Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллированной.

Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной или деминерализованной.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения лимонной кислоты при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.

Препарат глицилглицин должен содержать не менее 90% основного вещества.

5.1 Глицилглициновый буферный раствор активной кислотностью 7,8 pH

7,13 г глицилглицина растворяют в 70 см  дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Активную кислотность раствора устанавливают равной 7,8 pH приблизительно 15 см  раствора гидроокиси натрия по 5.5, добавляют 10 см  раствора хлорида цинка по 5.6 и доводят общий объем раствора дистиллированной водой до 100 см . Буферный раствор устойчив при температуре 4 °С 1 мес.

5.2 Раствор НАДН

0,030 г динатриевой соли  -никотинамидадениндинуклеотида ( -НАДН-Nа , массовая доля основного вещества не менее 98%) и 0,060 г углекислого кислого натрия по ГОСТ 4201 растворяют в 6 см  дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4 °С 1 мес.