Документ на русском языке

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА Испытания по оценке кожной сенсибилизации ГОСТ 32375-2013 Testing of chemicals of human hazard. Skin sensitisation

________________

Дата введения 2014-08-01

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения «Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУЗ «Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ» Роспотребнадзора); Федеральным государственным унитарным предприятием «Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ» (ФГУП «ВНИЦСМВ»)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 18 октября 2013 г. № 60-П)

За принятие проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD Test № 406 «Skin Sensitisation» (Кожная сенсибилизация)

Перевод с английского языка (en)

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС № 4, 2015 год

Предисловие

Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Введение

Количественные зависимости «структура-активность» и методы in vitro развиты недостаточно для оценки способности вещества вызывать кожную сенсибилизацию и, следовательно, по-прежнему должны основываться на моделях in vivo.

Морская свинка в течение нескольких десятилетий использовалась в испытаниях сенсибилизирующего действия. Были разработаны два типа тестов: адъювантные тесты, в которых сенсибилизация инициируется введением полного адъюванта Фрейнда (ПАФ), и неадъювантные тесты. До недавнего времени было рекомендовано использование четырех адъювантных и трех неадъювантных тестов. В настоящее время предпочтение отдается Максимизационному тесту на морских свинках (GPMT) Магнуссона и Клигмана, который является адъювантным, и неадъювантному тесту Бюхлера. Однако при определенных обстоятельствах для получения необходимой информации о сенсибилизации использование других методов также признается возможным.

Иммунная система мыши была исследована более подробно, чем иммунная система морской свинки. Были разработаны модели для оценки сенсибилизационного потенциала на мышах, обладающие рядом преимуществ, в частности, возможностью объективной оценки конечного результата испытания, короткой продолжительностью и минимальной процедурой обработки животных. Тест на отек уха мыши (MEST) и метод локальных лимфатических узлов (LLNA) считаются перспективными. Оба метода прошли проверку в разных лабораториях, в результате было доказано, что с их помощью могут выявляться умеренные и сильные сенсибилизаторы. Методы LLNA или MEST могут использоваться в качестве первого этапа оценки сенсибилизационного потенциала. Если в обоих испытаниях получен положительный результат, исследуемое вещество может быть признано потенциальным сенсибилизатором и для него не потребуется проведение дальнейшего испытания на морских свинках. Однако, если в LLNA или MEST получают отрицательный результат, испытания на морских свинках (GPMT или тест Бюхлера) должны проводиться с использованием процедуры, приведенной в данном стандарте.

1 Область применения

Настоящий стандарт закрепляет порядок проведения испытаний кожной сенсибилизации.

2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 индукционная экспозиция (Induction exposure): Экспериментальное воздействие на объект исследуемым веществом с расчетом вызвать сверхчувствительное состояние.

2.2 индукционный период (Induction period): Период, составляющий минимум неделю после индуктивной экспозиции, во время которого может развиваться сверхчувствительное состояние.

2.3 кожная сенсибилизация (аллергический дерматит) (Skin sensitisation): Иммунологически опосредованная кожная реакция на вещество. У человека реакции могут проявляться в виде зуда, эритемы, отека, папул, нарывов, волдырей или их комбинации. У животных реакции могут отличаться или наблюдаться только эритема или отек.

2.4 провокационная экспозиция (Challenge exposure): Следующее за индуктивным периодом экспериментальное воздействие исследуемым веществом на объект, который ранее подвергался воздействию данным веществом для определения, реагирует ли объект сверхчувствительным образом.

3 Принцип метода испытания

Обычно, экспериментальные животные подвергаются воздействию исследуемого вещества путем подкожной инъекции и/или накожного нанесения (индукционная экспозиция). Животные обрабатываются провокационной дозой, в течение 10-14 дней (индукционный период) может развиться иммунная реакция. Кожная реакция на провокационную дозу у подопытного животного сравнивается с реакцией у животных, которые подвергались фиктивному воздействию в индукционный период и получили провокационную дозу вещества.

4 Подготовка

4.1 Пол животных

Используются взрослые здоровые молодые мужские особи и/или женские особи, нерожавшие или небеременные.

4.2 Условия содержания и кормления

Температура лабораторной комнаты должна составлять (20±3) °С, относительная влажность - от 30% до 70%. Используется искусственное освещение в последовательности: 12 часов - свет, 12 часов - темнота. При кормлении может применяться стандартная лабораторная диета с неограниченным количеством питьевой воды. Очень важно, чтобы животные получали необходимое количество аскорбиновой кислоты

4.3 Подготовка животных

Акклиматизация к лабораторным условиям осуществляется в течение не менее 5 дней до начала испытания. Перед испытанием животных произвольно распределяют в тестовые группы. В зависимости от метода испытания для удаления шерсти используется срезание, бритье или химическая депиляция. Шерсть удаляют аккуратно, избегая повреждений кожного покрова. Животных взвешивают до начала и в конце испытания.

4.4 Проверка на достоверность

Чувствительность и надежность используемой экспериментальной техники должны оцениваться каждые шесть месяцев с помощью стандартных веществ, обладающих легким и умеренным сенсибилизирующим действием.

В правильно проведенном испытании для легких/умеренных сенсибилизаторов должны наблюдаться отклики: минимум 30% для адъювантного теста и не менее 15% для неадъювантного. В качестве стандартных веществ предпочтительно использовать гексилциннамальдегид (CAS № 101-86-0), меркаптобензотиазол (CAS № 149-30-4) и бензокаин (CAS № 94-09-7). При определенных обстоятельствах могут применяться другие контрольные вещества, удовлетворяющие приведенным критериям, с соответствующим обоснованием.

4.5 Удаление исследуемого вещества

Для удаления исследуемого вещества используют воду или растворитель, не влияющий на полученную реакцию и целостность кожного покрова.

5 Процедура испытаний

5.1 Максимизационный тест на морских свинках (GPMT)

5.1.1 Количество животных

Группа, подвергающаяся воздействию, должна содержать как минимум 10 животных, контрольная группа - 5. При использовании менее 20 тестовых и 10 контрольных морских свинок невозможно сделать вывод о том, является ли вещество сенсибилизатором, поэтому строго рекомендуется исследование дополнительных животных для получения как минимум 20 тестовых и 10 контрольных животных.

5.1.2 Уровни доз

Концентрация исследуемого вещества для индукционной экспозиции должна быть хорошо физиологически переносима и вызывать легкое/умеренное раздражение кожи. Концентрация в провокационной экспозиции не должна вызывать раздражение. Подходящие концентрации должны быть определены в предварительном испытании на 2-3 животных, если другая информация отсутствует. Для этой цели предпочтение отдают ПАФ-обработанным животным.

5.1.3 Индукционная экспозиция: подкожные инъекции

День 0 - исследуемая группа