ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР ЕДИНАЯ СИСТЕМА ЗАЩИТЫ ОТ КОРРОЗИИ И СТАРЕНИЯ ТОПЛИВА НЕФТЯНЫЕ Метод лабораторных испытаний биостойкости топлив, защищенных противомикробными присадками ГОСТ 9.023-74

ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 16 апреля 1974 г. N 900

ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт распространяется на нефтяные дистиллятные топлива и устанавливает метод лабораторных испытаний биостойкости топлив, защищенных противомикробными присадками.

Метод применяют также для определения противомикробного действия различных присадок.

Сущность метода заключается в инкубации топлив с присадкой в контакте с водно-минеральной средой (в дальнейшем - среда), зараженной специально подобранными микроорганизмами, активно разивающимися за счет данного топлива без присадки. Инкубацию проводят в условиях, оптимальных для развития микроорганизмов.

1.1. Образцами являются:

топливо, защищенное противомикробной присадкой - при оценке его биостойкости;

топливо, не защищенное присадкой - при оценке противомикробного действия присадок.

1.2. Образцы топлив отбирают по ГОСТ 2517-85  в количестве 500 см и испытывают без предварительной очистки и стерилизации.

2.1. Для испытаний применяют чистые культуры гриба Cladosporium resinae и бактерии Pseudomonas aeruginosa (pyocyanea).

Кроме того, допускается применять чистые культуры различных видов микробактерий (род Mycobacterium) и дрожжей Candida (С. guilliermondii, С. lipolytica, C. tropicalis), а также накопительные культуры, состав которых определяется источником их получения и нефтепродуктом, за счет которого они формируются.

2.2. Чистые культуры грибов и бактерий получают из коллекций или выделяют из накопительных культур.

2.3. Накопительные культуры выращивают на минеральной среде с испытуемым топливом без присадки; для этого зараженную минеральную среду смешивают с топливом в следующих соотношениях:

при выращивании на дизельных топливах и топливах для реактивных двигателей (в дальнейшем реактивное топливо) - по 3 см  среды и топлива;

при выращивании на бензинах - 10 см  среды и 1 см  бензина.

2.4. Заражение минеральной среды производят почвой, загрязненной нефтепродуктами, или водно-топливной смесью, пораженной микроорганизмами.

2.5. Для испытаний отбирают наиболее агрессивные штаммы чистых культур микроорганизмов и накопительные культуры, которые дают обильный рост на топливе без присадки не более чем через 14 суток культивирования. Для гриба Cladosporium resinae допустимо получение обильного роста не более чем через 30 суток.

2.6. Для испытаний отбирают культуры, дающие одинаково обильный рост при многократных последовательных пересевах на среду с топливом без присадки.

2.7. Культуры микроорганизмов, отобранных для испытаний, хранят на среде с топливом без присадки; пересев культур производят не реже одного раза в 4 месяца, а в перерывах между пересевами хранят при 2-5 °C. Число пересевов не должно превышать 10.

3.1. Материалы, реактивы, оборудование и посуда, применяемые для испытаний, приведены в приложении 1.

3.2. Посуду, вымытую и высушенную, закрывают ватными пробками, заворачивают в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу при 160 °C в течение 2 ч.

3.3. Для выращивания культур и испытаний готовят среды в соответствии с приложением 2.

3.4. Минеральные среды для предварительного выращивания Pseudomonas aeruginosa, микобактерий, дрожжей и накопительных культур разливают в пробирки:

для испытаний реактивных и дизельных топлив - по 3 см ;

для испытаний бензинов - по 10 см .

3.5. Для предварительного выращивания гриба Cladosporium resinae сусловый агар разливают в пробирки по 7-8 см .

3.6. Минеральные среды, водопроводную воду и корковые пробки стерилизуют в автоклаве при 121 °С (1 ати), а сусловый агар при 112 °С (0,5 ати) в течение 20-30 мин.

После стерилизации сусловый агар охлаждают в наклонном положении для получения скошенной поверхности.

3.7. В пробирки со средами, приготовленными по пп.3.3 и 3.5, добавляют испытуемое топливо без присадки (каждое в отдельную пробирку);

реактивного или дизельного топлива - 3 см ;

неэтилированного бензина - 1 см .

В приготовленные среды с топливом пересевают пипеткой культуры бактерий, дрожжей или накопительные культуры в количестве 0,3 см .

3.8. На скошенную поверхность суслового агара, приготовленного по пп.3.4-3.5, пересевают бактериологической петлей гриб Cladosporium resinae, 1 петлю на пробирку.

3.9. Пробирки с пересеянными культурами помещают в термостат на 10 суток при (29±2) °C для выращивания культур, которые служат посевным материалом для испытаний.

Содержание клеток в 1 см  посевного материала для культур Pseudomonas aeruginosa, микобактерий, дрожжей и накопительных культур должно быть не менее 1·10 .

3.10. Для испытаний допускается использовать ранее выращенные культуры, хранящиеся в холодильнике по п.2.7.

3.11. Для испытаний готовят суспензию спор гриба Cladosporium resinae, выращенного по п.3.9, переносом их бактериологической петлей со скошенного суслового агара в стерильную водопроводную воду из расчета 3-4 петли на 10 см  воды.

Суспензия пригодна для использования в течение 6 ч с момента приготовления.

3.12. Для определения противомикробного действия других присадок их вносят в образцы топлив в количествах, соответствующих программе испытаний.

3.13. Минеральные среды для испытаний разливают:

для испытаний реактивных и дизельных топлив - в колбы вместимостью 100 см  по 20 см ;

для испытаний бензинов - в колбы вместимостью 250-300 см  по 50 см .

Количество колб для испытаний каждого вида топлива соответствует числу видов микроорганизмов, применяемых для испытаний.