ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР ПТИЦА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ, СИНАНТРОПНАЯ, ДИКАЯ И ЭКЗОТИЧЕСКАЯ Методы лабораторной диагностики гриппа ГОСТ 25581-91

Дата введения 1993-01-01

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Московской ветеринарной академией им. К.И.Скрябина и Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов

РАЗРАБОТЧИКИ 

Н.Г.Осидзе, д-р биол. наук; В.И.Смоленский, канд. вет. наук

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 30.09.91 N 1575

3. Срок проверки - 1996 г., периодичность проверок - 5 лет

4. ВЗАМЕН ГОСТ 25581-83

5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

	

		

			
 
			
 
		
		

			

			
Обозначение НТД, на который дана ссылка
			
			

			
Номер пункта
			
		
		

			

			
ГОСТ 1770-74
			
			

			
2.1.1
			
		
		

			

			
ГОСТ 3118-77
			
			

			
2.3.1.1
			
		
		

			

			
ГОСТ 4159-79
			
			

			
2.1.1
			
		
		

			

			
ГОСТ 4233-77
			
			

			
2.1.1
			
		
		

			

			
ГОСТ 20292-74*
			
			

			
2.1.1
			
		
		

			

			
ГОСТ 22280-76
			
			

			
2.1.1
			
		
		

			

			
ГОСТ 25336-82
			
			

			
2.1.1
			
		
	

Настоящий стандарт распространяется на сельскохозяйственную, синантропную, дикую и экзотическую птицу и устанавливает методы лабораторной диагностики гриппа.

1.1. Для проведения исследований отбирают пробы патологического материала:

головной мозг и селезенку или гортанные и клоакальные смывы от больной птицы в первые два дня заболевания или от птицы в агональном состоянии. Патологический материал помещают в термос со льдом или раствор глицерина с массовой долей 50%, приготовленный на физиологическом растворе с рН 7,2-7,4;

сыворотку крови больной и переболевшей птицы в количестве 1-2 см  (не менее 20 проб).

1.2. Пробы крови для определения антител в сыворотке берут стерильно из подкрыльцовой вены в пробирки, увлажненные физиологическим раствором. Кровь выдерживают до образования сгустка при комнатной температуре или термостате при 37 °С в течение 1-2 ч, затем осторожно обводят иглой или пастеровской пипеткой по стенке пробирки и оставляют на 16-18 ч при температуре 2-4 °С. Образовавшуюся прозрачную без гемолиза сыворотку отсасывают пипеткой в стерильные пробирки.

Для ретроспективной диагностики используют парные пробы сывороток крови, полученные от больных и подозреваемых в заболевании птиц в начале заболевания и через 4-10 сут.

1.3. Пробы патологического материала и сывороток крови доставляют в лабораторию в термосе со льдом. К пробам прилагают сопроводительный документ, содержащий сведения о клинике, эпизоотологии заболевания, а также данные о результатах вскрытия трупов.

1.4. До начала лабораторного исследования патологический материал хранят в рефрижераторе при температуре 2-4 °С не более 24 ч.

1.5. Сыворотку крови исследуют в течение 3 сут со дня взятия крови. В случае исследования сыворотки в более поздние сроки ее замораживают или консервируют путем добавления мертиолата натрия до концентрации 1:10000.

2.1. Метод выделения вируса

Сущность метода заключается в выделении вируса на эмбрионах кур и последующей его идентификации.

2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы 

Термостат с температурой нагрева 37-38 °С. 

Центрифуга с частотой вращения 3000 . 

Центрифужные стаканы вместимостью 50-100 см . 

Весы лабораторные с погрешностью взвешивания не более 0,1 г.

Размельчитель тканей.

Овоскоп.

Колбы конические стеклянные вместимостью 100 см  по ГОСТ 1770 .

Пробирки стеклянные вместимостью 10, 15, 20 см  по ГОСТ 25336 .

Пипетки пастеровские или пипетки стеклянные измерительные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см  по ГОСТ 20292. 

Ступка фарфоровая. 

Шприцы с иглами. 

Стекло кварцевое. 

Натрий хлористый по ГОСТ 4233 , раствор с массовой долей 0,8% или другие дезинфицирующие средства.

Натрий лимонно-кислый 3-х замещенный по ГОСТ 22280 , раствор с массовой долей 5%.

Йод по ГОСТ 4159 , раствор с массовой долей 5% на физиологическом растворе.

Антибиотики - пенициллин и стрептомицин.

Среды питательные МПБ и МПА.

Парафин.

Развивающиеся эмбрионы кур 9-10-суточного возраста.

Эритроциты кур на физиологическом растворе, 0,7 и 1%-ная взвесь, которую готовят следующим образом: кровь берут у петухов или кур в возрасте старше 6 мес из подкрыльцовой вены в колбу с физиологическим раствором в равных объемах с раствором лимонно-кислого натрия.

Полученную кровь трижды отмывают физиологическим раствором, осаждая эритроциты центрифугированием с частотой вращения 1500  в течение 10 мин. Из осадка эритроцитов готовят 0,7 или 1%-ную суспензию на физиологическом растворе и хранят не более 5 сут при температуре 4 °С.

2.1.2. Подготовка к исследованию

2.1.2.1. Обработка органов патологического материала

Патологический материал стерильно извлекают из глицеринового раствора, трехкратно ополаскивают стерильным физиологическим раствором и гомогенизируют с помощью размельчителя тканей или размельчают в ступке с кварцевым стеклом. Гомогенат разводят 1:10 стерильным физиологическим раствором и центрифугируют с частотой вращения 1500-2000  в течение 15 мин. Надосадочную жидкость переносят в стерильные пробирки, добавляют 1000 ед/см  стрептомицина и выдерживают при комнатной температуре 60 мин.